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微生物檢驗常見問題解答
微生物包括：細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類等在內的一大類生物群體，它個體微小，與人類關系密切。以下是小編為大家收集的微生物檢驗常見問題解答，僅供參考，歡迎大家閱讀。
一、方法驗證
1.做過驗證的樣品微生物檢驗方法是否都需要按照新的方法進行重新驗證？
答：對于微生物限度檢查的產品而言，由于培養時間調整，應重新進行驗證。對于無菌檢查的產品而言，如果方法未作實質性調整，可以不必重新驗證。個別產品在各論中收載了新的無菌檢查方法，對這些品種，應對收載方法的適用性進行驗證。
2.以前做過無菌驗證的品種是否需要重新按照新的標準再驗證？
答：參見問題1。
3.“新增抗生素供試品應選擇低吸附的濾器及濾膜”比如注射用克林霉素磷酸酯屬于抗生素，是否需要重新選取濾膜再驗證？
答：目前采用的方法如果經驗證表明可行，則可以繼續使用該方法。
4.微生物方法學驗證時，培養時間是否跟樣品日常檢驗所培養時間一致？
答：應該一致。
5.微生物限度驗證時，如果一個方法只有金葡回收率達不到要求，該方法時是否可以用來做細菌霉菌的檢測方法？
答：按藥典的規定，一個計數方法通過驗證，是指所有試驗菌的回收率均達到要求。如果采用各種方法以及方法的組合仍無法使金葡回收率達標，則可以采用使金葡回收率最高的方法作為計數方法。
6.薄膜過濾的沖洗量不能超過1000ml，我公司的喹諾酮類產品原來的方法是每張膜沖洗量為1500和2000ml，請問有沒有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能符合規定？
答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：
1)降低接觸濾膜的供試品的濃度;
2)改進沖洗的方式，如少量多次地沖洗、降低蠕動泵的轉速等;
3)添加中和劑，如高價金屬離子。
7.微生物限度檢查法規定，技術方法驗證時，采用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的回收率達不到要求，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行供試品檢驗。請問，上述方法是指僅通過一種方法還是一定要通過幾種方法聯用的？
答：應該要把可能采用的所有方法包括方法聯用都進行驗證。
8.供試品不溶于稀釋劑，同時又有抑菌性，限度檢查時應如何消除抑菌性？
答：采用低速離心的方式，盡可能把供試品去除干凈，取離心后的上層液，進行薄膜過濾。
9.不溶于水的固體產品，加表面活性劑后，如何操作才能在方法驗證中得到較好的回收率？
答：同問題8。
10.有些品種2010年藥典與2005年比較檢驗方法變了，是否需要驗證或確認？
答：同問題1。
二、菌種管理
1.濃菌液的有效期該如何確定？
答：藥典沒有規定。可以通過實驗確定有效期。例如，在不同的時間點測定濃菌液的濃度，從而判斷其有效期。
2.藥典要求菌液在制備后2小時內使用，若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時內使用，那我們在做驗證或陽性對照是要加一定量的菌就沒有時間進行平板計數了，該如何確保所加菌量準確？
答：藥典對稀釋菌液的使用期限作出規定，并不會影響操作過程中稀釋菌液的加入。即便不規定，也無法在準確知道菌液濃度的情況下加入試驗菌。菌液稀釋的實驗操作和加入菌液的實驗操作應該是在同一次實驗中完成的，要使加入的菌量符合藥典的規定，可以從濃菌液的制備方法、菌液稀釋的方法等方面進行規范，也可以引入濁度比較的方法。
3.菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量？
答：活菌含量是無法確定的。總菌量可以通過比濁的方式確定。
4.具體從哪些方面進行菌種菌株的特性和純度確認？如何操作？
答：基層的微生物實驗室進行菌種純度確認可以考慮以下一些方面：1)形態學鑒定，包括菌落形態和染色形態;2)生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統。
5.黑曲霉凍干菌種如何轉種，傳代？
答：與其他菌種一樣，所不同的是使用的培養基應改為改良馬丁瓊脂培養基。
6.干粉狀的是否可做第0代使用？
答：只要是菌種保藏機構提供的凍干保藏的菌種，可以確定為第0代。
7.菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認嗎？
答：從外部購入的菌種，在進入本實驗室的菌種保藏體系時，需要進行純度和特性的確認。以后的每次傳代，可以通過顯色培養基做簡單的確認即可。
8.如采用低溫保存菌種，需購買哪些設備？能夠到省所進行實際操作培訓？
答：低溫冰箱，應能夠提供-70℃的低溫。可以到省所來培訓。
9.做方法驗證時，工作用菌種能否同時操作，如何防止交叉污染？
答：可以同時操作。避免交叉污染的關鍵是無菌操作技術。
10.是否等菌懸液的含菌數出結果后再做適用性等檢查？
答：沒有必要。可參見問題2。
11.菌液制備中菌液是否都要驗證儲存期？
答：稀釋菌液可參考藥典規定。如要保存濃菌液，則需要驗證有效期。
12.菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購買的菌種是否每次都可以出具規范的COA？
答：中國藥典使用CMCC的菌種，并沒有規定可以使用其他等效的菌種。省所提供的菌種嚴格講屬于標準貯備菌種，無法提供ATCC這樣的COA。CMCC至今也無法提供這類證明。
13.銅綠假單胞如何保藏？答：可以使用低溫冷凍保存的方法。
14.工作用菌液是否屬于亞培養或傳代一次？
答：工作用菌液應屬于一次傳代。
三、微生物限度
1.包裝材料的大腸埃希菌檢查？
答：根據包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種，一種是將浸提液合并后，取一部分，接種膽鹽乳糖培養基進行檢查;另一種是將浸提液合并后，薄膜過濾，然后按規定的方法檢驗。
2.抗真菌藥品的微生物限度檢查法
答：這類產品的霉菌和酵母菌計數方法需要進行調整，可以根據產品劑型的不同，選擇薄膜過濾法或培養基稀釋法等方法。
3.為什么在日常樣品檢測中還需要做陽性對照(國外不需要)？
答：為了確保每一次檢測對可能存在的微生物都是有效的。
4.對于同一個品種，藥典為什么不規定統一的檢測方法？
答：本版藥典進行過這樣的嘗試，也有某些品種已經收載了統一的檢測方法，如注射用頭孢類抗生素的無菌檢查。之所以沒有大量收載，主要是由于檢測方法還沒有經過必要的復核。將微生物檢驗的統一方法收載在品種的各論項下，始終是努力的方向。
5.梭菌檢查中需置厭氧條件下培養48小時，是否指在厭氧培養箱中？
答：需要在厭氧培養裝置中進行培養，未必一定是厭氧培養箱。
6.控制菌檢查方法驗證時，采用多種方法均未檢出控制菌，如何處理？
答：在確保所使用的各種方法都沒有錯誤的情況下，如果仍無法使試驗菌生長，則應該采用薄膜過濾法進行檢查。理由是該方法能夠最大程度地去除產品的抑菌作用。
7.常規的監督抽樣檢品(包括原料)在進行微生物限度檢查時，是否一定要進行活螨檢查并在原始記錄與報告書中體現？
答：需要進行檢查。可以在原始記錄中體現，報告書上可以不出現，除非當發現有活螨檢出。
8.藥包材微生物限度檢查規定了合格質量水平，通常產量下取樣8個，要求8個瓶子均符合規定，如何進行？
答：每個瓶子分別進行實驗。
9.大腸埃希菌具體操作規程？
答：參見中國藥品檢驗標準操作規程。
10.動物組織及動物類原藥材的提取物入藥，是否需要檢沙門菌？
答：需要進行沙門菌檢查。
11.關于中國藥典菌落計數結果的判斷還存在疑義，望能舉例說明。
答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面。2010年版對結果報告進行了較大篇幅的修訂，目前的規定應該比05版更為清晰、明確。
12.需做沙門菌檢驗樣品量的確定？
答：10g(ml)用于樣品計數檢驗和其他控制菌檢查，10g(ml)用于沙門菌檢查，10g(ml)用于沙門菌檢查的陽性對照。需要進行沙門菌檢查的樣品，檢驗用量應為30g(ml)。
13.日常的實驗室裝備能否達到梭菌無氧的培養要求？
答：完全可以。可以采用厭氧培養盒(罐)。
14.如果一個產品有兩個規格，是否可以取其中之一做陽性對照？
答：每個規格均需進行陽性對照。
15.細菌數為100g/g的，樣品稀釋級只做1:10,1:100的倍數就可以了嗎？
答：可以。
16.培養時間3天，5天，可理解為72小時，120小時嗎？
答：可以。這樣更為嚴謹。
17.中國藥品檢驗標準操作規范“已做驗證試驗的供試品，在檢查時刻不必再做陽性對照”如何理解？
答：該標準操作規范中在無菌檢查法中規定“供試品無菌檢查應進行陽性對照試驗”，表明不論是否進行了方法驗證，在產品的每一次檢驗過程中，還必須進行陽性對照。在控制菌檢查的大腸埃希菌項下，指出“已做驗證試驗的供試品，在該供試品檢查時不必再作陽性對照”。該規定僅適用方法驗證與供試品檢查同時開展的情況。2005年版藥典和2010年版藥典在控制菌檢查中均對陽性對照試驗有明確規定，“進行供試品控制菌檢查時，應做陽性對照試驗。”產品檢驗中應以藥典規定為準。
18.無菌檢查和微生物限度檢查中，產品中規定的溶解液是否可以換成其他的溶液？
答：可以。
19.制劑通則中，沒有微生物檢查項目的，是否可不進行微生物項目檢測？
答：可以。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑。
20.在細菌、霉菌和酵母菌計數中，適用性檢查細菌是培養48小時，霉菌和酵母菌是培養72小時，供試品檢查中細菌是培養3天，霉菌和酵母菌是培養5天，那方法驗證中應參照哪個時間進行培養。
答：應按照供試品檢驗時的條件，即細菌3天，霉菌和酵母菌5天。
21.測定純化水微生物限度時，每張濾膜過濾量是多少合適？需要先稀釋嗎？過濾完后需不需要沖洗？假如我取10ml純化水通過雙杯體封閉式薄膜過濾器過濾，每張濾膜上的計數是以5ml為單位還是10ml為單位？
答：過濾量應以培養后出現的微生物數不超過100cfu/膜為標準。一般可不稀釋。不需要沖洗。每張濾膜的過濾量為5ml。
22.2010藥典中關于純化水的微生物限度是：細菌、霉菌及酵母菌總數每1ml不得過100個。這句話的意思是細菌總數每1ml不得過100個，霉菌及酵母菌總數不得過100個，還是細菌+霉菌+酵母菌總數每1ml不得過100個。如果是三者總數的話，那細菌總數限度是多少？霉菌及酵母菌總數限度又是多少？
答：是總數不得過100個。沒有必要考慮各自的限度值。
拓展閱讀：微生物檢驗的名詞解釋大全
微生物：是一群個體微小 結構簡單 肉眼不能看見的微小生物的總稱
種：親緣關系較近的微生物群體 在進化發育階段上有一定的共同形態和生理特征
微生物學：生物學的一個分支 是研究微生物在一定條件下的形態結構 生理生化遺傳變異特性及微生物的進化 分類 生態等生命活動規律以及微生物之間 與人類 動植物 自然界互相關系的一門科學
抗生素：是由某些微生物在代謝過程中產生的 能抑制或殺滅某些其他微生物和腫瘤細胞的微量生物活性物質
細菌素：是某些細菌菌株產生的一類具有抗菌作用的蛋白質
條件致病菌：正常菌群在宿主體內具有相對穩定性 一般不致病
消毒：指殺死物體上的病原微生物但不一定能殺死細菌芽孢的方法
滅菌：指殺滅物體上所有的微生物的方法
防腐：指防止或抑制微生物生長繁殖的方法
無菌：指沒有貨的微生物的存在
質粒：是細菌染色體外的遺傳物質 也是環狀閉合的雙聯DNA分子 比染色體小 存在于細胞質中 可自主復制
突變：是指細菌遺傳物質的機構發生突然而穩定的改變 所致的變異現象可遺傳給后代 基因轉移：外源性物質由供體菌轉入受體細胞內的過程
基因重組：供體菌的基因進入受體菌細胞 并在其中自行復制與表達 或矛受體菌DNA整合在一起的過程
病毒：是一類個體微小 結構簡單 只含一種核酸 只能在活的易感細胞內以復制方式增殖的非細胞型微生物
復制周期：病毒的增殖被人為分成吸附 穿入 脫殼 生物合成 裝配 成熟與釋放七個步驟的完整過程
缺陷病毒：是指因病毒基因組不完整或因基因某一點改變而不能進行正常增殖的病毒 頓挫感染：病毒進入宿主細胞 若細胞缺乏病毒復制所需的酶 能量和必要成分等 則病毒無法合成自身成分不能夠裝配和釋放子代病毒的現象
干擾現象：兩種病毒感染同一種細胞時 可發生一種病毒抑制另一種病毒增殖的現象 人工自動免疫：是將疫苗等免疫原接種于人體 刺激機體免疫系統產生特異性免疫應答 使機體獲得特異性免疫力
人工被動免疫：是指注射含某種病毒特異性中和抗體的免疫血清等一系列細胞因子 是機體立即獲得特異性免疫
干擾素：是由病毒或干擾素誘生劑作用于中性粒細胞 成纖維細胞或免疫細胞產生的一種糖蛋白
致病性：一定種類的病原微生物 在一定的條件下能在特殊的宿主體內引起特定疾病的能力 半數致死量：在規定時間內 通過一定途徑 能使一定體重或年齡的某種動物半數死亡或感染需要的最小病原體數量或毒素量
急性感染：發作突然 病程較短 一般是數天或數周
局部感染：病原體侵入機體后 局限就在一定部位生長繁殖引起病變的一種感染類型 毒血癥：致病菌侵入宿主體后 只在機體局部生長繁殖 病菌不進入血液循環 但其產生的外毒素入血 引起特殊的毒性癥狀
敗血癥：致病菌侵入血流后 在其中大量繁殖并產生毒性產物 引起全身性毒性癥狀
內毒素血癥：革蘭陰性菌侵入血流 并在其中大量繁殖 崩解后釋放出大量毒素 也可有病灶內大量革蘭陰性菌死亡 釋放的內毒素入血所致
培養基：是指人工方法配制的適合細菌生長繁殖的營養基質
CFU：菌落形成單位
細胞病變效應（CPE）：是指某些病毒感染組織細胞后 正常生長的梭形細胞變圓 變性 壞死 溶解及從培養瓶壁脫落 細胞堆積形成葡萄狀
包涵體：某些病毒感染細胞后 可在細胞核或細胞質中形成包涵體
醫院感染：是指住院患者在醫院內獲得的感染 包括在住院期間發生的感染和在醫院內獲得出院后發生的感染 但不包括在入院前已開始或住院時已存在的感染
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